干細胞的原代提取

干細胞的原代提取

神經(jīng)干細胞
目前，神經(jīng)干細胞的分離方法主要有三種：無(wú)血清培養基自然篩選法、流式細胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。
無(wú)血清培養基自然篩選法是迄今應用，也是zui簡(jiǎn)單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養基使成熟的神經(jīng)細胞無(wú)法較長(cháng)時(shí)間地成活，而分離篩選出能夠在該培養條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細胞群體。

步驟： （1）取胎腦；
（2）用吸管吹吸使細胞分散均勻；
（3）加小鼠神經(jīng)干*培養基培養。

脂肪間質(zhì)干細胞
分離培養脂肪干細胞主要是通過(guò)膠原酶進(jìn)行消化，獲得細胞懸液。分離培養大鼠脂肪間質(zhì)干細胞的大致步驟如下：
（1）取腹股溝處脂肪，充分剪碎；
（2）加入膠原酶，將其轉移至離心管中進(jìn)行消化30分鐘，加入培養基終止消化；
（3）離心，大鼠脂肪間質(zhì)干細胞培養基重懸，接種至培養瓶中。

骨髓間質(zhì)干細胞
目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法。全骨髓貼壁法的原理是根據間質(zhì)干細胞在低血清培養基中有貼壁優(yōu)勢特性，定期換液除去不貼壁細胞，從而達到純化與擴增間質(zhì)干細胞的目的。
步驟 : （1）取大鼠股骨和脛骨，以*培養基沖洗股骨和脛骨骨髓，轉移至離心管中，離心，去上清；
（2）大鼠骨髓間質(zhì)干細胞培養基重懸，接種培養；
（3）原代培養36h全液量換液，去除未貼壁的造血細胞，以后每3天換液一次，直到細胞80-90融合傳代。