PCR常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)

PCR常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)

1.矩陣形式代表什么？

矩陣形式就是體外包裝的cDNA文庫以二維矩陣的形式進(jìn)行排列組合，用于篩選特定的基因和片段。

2．SM是什么意思？

SM是“懸浮培養液”的縮寫(xiě)。

3．Ct 值的定義

在熒光定量PCR技術(shù)中，有一個(gè)很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個(gè)反應管內的熒光信號到達設定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數

4．什么是內參照法？

在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時(shí)，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長(cháng)度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或液相分離開(kāi)來(lái)，分別測定其熒光強度，以?xún)葮藶閷φ斩看龣z測模板。 　　

5．PCR－ELISA法：利用地高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗地高辛或生物素酶標抗體－辣根過(guò)氧化物酶結合物，zui終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗，若加入內標，作出標準曲線(xiàn)，也可實(shí)現定量檢測目的。
 

6． 什么是競爭法？

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴增（其中一個(gè)引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過(guò)電泳或液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。