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以往CFU-GM培養的刺激物多用人白細胞、胎肌以及胎盤(pán)裂解液作為條件培養基等,現多用造血生長(cháng)因子替代.這些細胞因子包括GM-CSF、G-CSF、M-CSF以及IL-3等,但常用GM-CSF.培養基多用IMDM,RPMI等,培養基常用瓊脂以及甲基纖維素,但效果前者較好.
培養體系包括20%-30%胎牛血清,50ng/mlGM-CSF,細胞懸液中細胞總數一般以(1-2)X10^5/ml為宜,其余用IMDM或RPMI補齊,但保持瓊脂終濃度為0.3%,甲基纖維素終濃度為0.9%-1.0%.細胞一般置于直徑為33mm的培養皿或6孔板中,于37℃、5%CO2飽和濕度環(huán)境下培養.
(1)集落計數 一般培養10-14天觀(guān)察集落,大于40個(gè)細胞的細胞團為一個(gè)集落.
(2)集落形態(tài) 一般CFU-GM的形態(tài)分3種.
致密型 細胞緊密成團,細胞個(gè)體較小,對為粒細胞為主的集落.
混合型 細胞團中央為緊密成團的粒細胞,周?chē)鷱浬⒎植贾?zhù)單核細胞或巨噬細胞.
松散型 細胞團比較均勻地分散,細胞個(gè)體較大,多為單核細胞和巨噬細胞組成.