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下面是我司為大家講述一些豬β半乳糖苷酶(β-GAL)ELISAkit使用說(shuō)明書(shū)ELISA實(shí)驗中的小技巧,希望對大家有所幫助!
1. 操作前應對實(shí)驗的物理參數有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
2. 正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,避免刮擦包被板底部。
3. 加樣過(guò)程中避免液體外濺,血清殘留在反應孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,否則可導致結果錯誤,實(shí)驗重復性差。
4. 手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數,洗液在反應孔內滯留的時(shí)間不宜太長(cháng)。不要使洗液在孔間竄流,造成孔問(wèn)污染,導致假陰性或假陽(yáng)性。
5. 要保證加液量一致ELISA試劑盒我們在使用時(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準,造成顯色不統一,判斷錯誤。
6. 顯色液量不可過(guò)多加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下,加顯色系統后要避光反應,顯色液量不能過(guò)多,以免顯色過(guò)強。
豬β半乳糖苷酶(β-GAL)ELISAkit使用說(shuō)明書(shū)間接法測抗體步驟:
間接法是檢測抗體常用的方法,其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱(chēng)為間接法,操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結,形成固相抗原,洗滌除去未結合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的樣本,保溫反應,樣本中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物,
3)經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過(guò)程中被洗去。
4)加酶標抗抗體,固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結合,從而間接地標記上酶,洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
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